根據(jù)ZeptoMetrix的p24試驗，默克sigma aldrich確定每毫升慢病毒的轉(zhuǎn)導(dǎo)單位（TU/mL）。通過使用來自Didier Trono的轉(zhuǎn)換因子，將p24的濃度轉(zhuǎn)換為病毒滴度來確定滴度計算方法。每pg p24抗原中有大約1 x 104個慢病毒的物理微粒。根據(jù)ELISA試驗結(jié)果，每pg p24抗原中有100個轉(zhuǎn)導(dǎo)單位（TU）。

材料

· 靶向選定基因的慢病毒

· 來自ZeptoMetrix的p24 ELISA

· 計算器或電子表格程序

實驗方案

1. 稀釋樣品750到3000倍。

2. 使用p24 ELISA試劑盒，并按照制造商的說明進行操作。

3. 永遠用空白對照使讀版器“歸零"。

4. 永遠使用p24標(biāo)準(zhǔn)曲線進行校準(zhǔn)。

5. 使用兩種獨立的稀釋液用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，包括五種濃度和濃度為0的p24。

6. 將標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制成p24濃度比OD450。

7. 擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)依從R2> 0.95。

8. 確定斜率m和截距b。（您也可以下載并使用附件中的電子校準(zhǔn)表格。）

9. 根據(jù)以下公式計算稀釋病毒的滴度TU/mL（您也可以下載并使用附件中的電子表格。）

注意事項

下載附件中的電子表格（95 Kb）以計算TU/mL。
轉(zhuǎn)換因子推導(dǎo)：

a. （2×103個分子）×（每PP的24×103 Da p24）=（48×106）
b. 48×106/Avogadro常數(shù)=（48×106）/（6×1023）= 8×10-17 g p24/PP c. 每1×10-16克p24約有1PP d. 每pg p24有1×104 PP
e. 每1000PP有100TU